رساله دکترای رشته پزشکی با عنوان تولید، خالص‌سازی، تعیین ساختمان و بررسی اثرات سمیت سلولی پیگمان تولید شده توسط سویه سراشیا مارسه‌سنس PTCC 1111
خلاصه فارسی :
سراشیا مارسه سنس یك باسیل گرم منفی از خانواده بزرگ انتروباكتریاسه می‌باشد، كه با توجه به تولید سه آنزیم خاص شامل DNAase، Lipase و gelatinase از سایر گونه‌ها تشخیص داده می‌شود. ویژگی دیگر این باكتری تولید یك پیگمان قرمز رنگ درون سلولی به نام prodigiosin می‌باشد. این پیگمان به دلیل داشتن اثرات ضدقارچی، ضد باكتریایی و ضد پروتوزوآیی به عنوان یك داروی پر آتیه مطرح می‌باشد. امروزه انواع بدخیمی‌ها و سرطان‌ها از علل شایع مرگ و میر در سراسر دنیا می‌باشند كه درمان آنها نیز تا به حال موفقیت آمیز نبوده است. یكی از مشكلات علم پزشكی شكست دارو درمانی در درمان سرطان است، این شكست می‌تواند به دلیل عدم تحمل دارو از طرف بیمار، عوارض شیمی درمانی و یا بروز مقاومت دارویی باشد.
بر این اساس و همچنین به علت پیامدهای اجتماعی سرطان، جامعه پزشكی امروزه به دنبال شناسایی تارگت‌های جدید و تركیباتی با سمیت كمتر و اثر بخشی بیشتر نسبت به عوامل شیمی درمانی كه در حال حاضر استفاده می‌شود می‌باشند و از آنجایی كه با استفاده از میكروارگانیسم‌ها می‌توان به داروهای ضد سرطان با اثرات اختصاصی‌تر و سمیت كمتر برای انسان دست یافت كه روش‌های تولید آنها نیز مقرون به صرفه می‌باشد، لذا هدف از این پایان نامه تولید، خالص‌سازی، تعیین ساختمان و بررسی اثرات سمیت سلولی پیگمان تولید شده توسط سویه سراشیا مارسه‌سنس PTCC 1111 می‌باشد.
به منظور تولید پیگمان، باكتری در محیط نوترینت براث كشت داده شد و به مدت 5 روز در دمای 28، گرمخانه گذاری گردید. سپس محیط كشت سانتریفوژ شد و پیگمان با استفاده از اتانول اسیدی از داخل سلول‌ها استخراج گردید. به منظور خالص‌سازی پیگمان از كروماتوگرافی ستونی استفاده شد. با استفاده از طیف و LC/MS مشخص شد كه این پیگمان یك تركیب تری پیرولی با اسكلت pyrrolypyrromethen و یك گروه متوكسی در موقعیت 4 و وزن مولكولی Da 323 می‌باشد.آزمایشات سمیت سلولی بر روی دو رده سلولی HT29 و T47D با استفاده از آزمون MTT انجام شد و مشخص شد كه Prodigiosin بر روی هر دو رده سلولی HT29 و T47D اثر مهار كنندگی رشد قابل قبولی داشته كه این اثر مهاركنندگی، اثری وابسته به غلظت و زمان بوده و با افزایش غلظت و مدت زمان مجاورت، این اثر افزایش می‌یابد. لازم به ذكر است كه اثر مهار كنندگی رشد prodigiosin بر روی سلول‌های HT29 به طور مشهودی بیشتر از سلول‌های T47D بوده است. با توجه به نتایج به دست آمده چنین به نظر می‌رسد كه prodigiosin این پتانسیل را دارد كه برای طراحی داروهای ضد سرطان جدید مورد مطالعه قرار گیرد.
کلمات کلیدی:
پیگمان
سرطان
prodigiosin
سمیت سلولی
محیط نوترینت براث
كروماتوگرافی ستونی
سویه سراشیا مارسه‌سنس PTCC 1111
1-1- اهمیت مسأله
بیماری سرطان یکی از معضلات اصلی طب کنونی و از علل عمده مرگ و میر در جهان است. لذا با توجه به گسترش انواع سرطان ها در جوامع بشری امروزی، شناسایی تارگت های جدید و طراحی و توسعه عوامل شیمی درمانی اختصاصی تر دو هدف بسیار مهم در تحقیقات به منظور یافتن داروهای ضد سرطان با اثر بخشی بیشتر و سمیت کمتر می باشد.یک خانواده از پیگمان های قرمز رنگ توسط گروهی از باکتری ها از جمله سراشیا مارسه سنس تولید می شود که اخیراً اثرات بیولوژیکی مختلفی مانند اثرات ضد باکتریایی، ضد قارچی، ضد پروتوزوآیی و سمیت سلولی بر روی برخی از رده های سلول های سرطانی مانند سرطان کولون، پستان ،ریه و ... برای آنها گزارش شده است (1).
تحقیقات انجام شده حاکی از آن است که این پیگمان ها باعث افزایش مرگ سلولی به صورت اختصاصی (آپاپتوز) در سلول های سرطانی می شوند، در حالی که هیچ گونه سمیت بارزی روی سلول های غیر بدخیم ندارند. با توجه به خصوصیات ضد سرطانی این خانواده انستیتو ملی سرطان (NCI) هم اثرات سایتوتوکسیک ترکیبات طبیعی این خانواده را تایید کرده است(2).از آنجایی که با استفاده از میکروارگانیسم ها می توان به داروهای ضد سرطانی با اثرات اختصاصی تر و سمیت کمتر برای انسان دست یافت که روش های تولید آنها نیز مقرون به صرفه می باشد لذا تولید، خالص سازی و تعیین ساختمان پیگمان تولید شده توسط سویه سراشیا مارسه- سنس1111 PTCCکه بومی ایران می باشد و بررسی اثرات سمیت سلولی آن بر روی برخی رده های سلول های سرطانی به منظور توسعه داروهایی با پتانسیل بالای درمان سرطان از اهمیت و ضرورت خاصی برخوردار می باشد.
دانلود در ادامه مطلب
دانلود پایان نامه رشته نقاشی